结直肠癌是人类最常见的恶性肿瘤之一，全球发病率居 恶性肿瘤第 3 位，死亡率居第 2 位。在我国，结直肠癌发 病率亦呈现逐年上升趋势。根据 2019 年国家癌症中心数 据显示，2015 年中国结直肠癌新发病例 38.8 万，死亡病例 18.7万。因此，结直肠癌的早期筛查及预防是降低发病率和提高治愈率的关键。

随着精准医疗理念及对肿瘤相关分子标志物研究的逐年深入，合理的检测及应用结直肠癌相关分子标志物已经成为目前临床实践的重要部分。那么，关于结直肠癌筛查标志物检测的临床应用有哪些？本文主要对结直肠癌治疗中与方案选择和预后判断有关的分子标志物的检测标本和方法进行总结。

目前在临床中，用于结直肠癌分子标志物检测的标本来 源主要为患者的肿瘤组织标本以及外周血标本，其中外周血标本又涵盖了外周血有核细胞、血液无细胞液体成分及循环肿瘤细胞（CTC）。

一、检测标本

肿瘤组织标本

肿瘤组织标本中具有较富集的肿瘤细胞，可更真实地反映肿瘤中基因的变异情况，但由于无法区分突变是体细胞突变还是胚系突变，因此不能用于遗传性疾 病如林奇综合征的诊断。肿瘤组织样本又可根据其来源分 为原发灶样本和转移灶样本。对于结直肠癌相关 KRAS、 NRAS和BRAF基因的突变，在原发灶样本和转移灶样本中的 一致性非常高

外周血标本

外周血有核细胞标本能明确反映胚系突 变情况，可用于遗传性患者的诊断。但外周血有核细胞不能 反映肿瘤组织的体细胞突变，无法帮助临床预测相关药物的治疗效果。外周血有核细胞标本基因检测时要注意CTC可能带来的干扰。

近年来，微侵入性的液体活检技术显示出良好的应用前景。对外周血进行分离纯化后可以检测 CTC 或者 cfDNA。cfDNA 是指游离于血液中的细胞外DNA，主要来源于衰老、凋亡的血细胞和肿 瘤细胞释放的片段化DNA，因此可以表达来自肿瘤的DNA。 循环肿瘤DNA（ctDNA）是肿瘤细胞凋亡后进入血液的游离DNA，是cfDNA的一种，其监测或能更 早地预测疾病复发；为术前新辅助治疗及术后辅助治疗 的疗效评估提供参考。但目前尚缺乏特异性验证和可靠 的重复试验。

二、检测方法及常规分子标志物检测

目前，分子标志物的检测方法包括免疫组织化学 （IHC）、荧 光 原 位 杂 交 技 术 （FISH）和基因测序等。不同类型的标本和变异需要选择不同的检测方法。

IHC操作简单，费用低，目前已在临床广泛使用。它主要用于检测蛋白的表达，但不能反映基因变异情况，目前只 用于筛查。FISH在临床中广泛用于基因扩增、缺失及倒位异位的检测。

 结直肠癌分子标志物检测的适应证与时机（注：FAP：家族性腺瘤性息肉病；P⁃J综合征：黑斑息肉病；MMR：错配修复基因；MSI：微卫星不稳定 ）

基因测序方法中，Sanger 测序法及荧光定量 PCR 费用适中，是临床检测中用于检测基因变异的传统技术，但只能检查一个基因特定范围内的突变，目前是在结直肠癌分子标志物检测中使用最多的检测方法。

第2代测序 （NGS）因其检测的高通量，一次检测可以包含几十个、上百个甚至整个基因组的变异情况， 对于需要同时检测很多个基因、但样本量又有限的病例，具有较大优势。

（一）常规分子标志物检测

随着对结直肠癌发病机制的深入研究和基因检测能力 的提高，与结直肠癌发病和治疗相关的基因越来越多。目 前，国内外已有的相关指南及实践推荐检测的结直肠癌相关 基因包括APC、MMR、RAS和BRAF等。与此同时，对于其他 一些具有潜在临床意义的基因也得到越来越多的关注，包括 Her⁃2扩增/过表达、PIK3CA突变和NTRK融合等。

专家推荐：对于所有mCRC患者，均推荐在综合治疗前行常规分子标志物检测（RAS基因突变、BRAF基因突变、 MSI状态/MMR蛋白表达），根据结果制定个体化治疗方案； 推荐对于所有临床怀疑林奇综合征的患者，检测MSI状态/ MMR蛋白表达进行遗传筛查。对于经标准治疗失败的mCRC患者，可进行Her⁃2扩增/过表达和NTRK基因融合的检测；PIK3CA突 变检测和TMB检测仅限研究使用。

（二）其他分子标志物检测

目前，其他潜在的分子标志 物在结直肠癌中的发生率低，临床意义及靶向治疗的反应性 尚在评价中，如Her⁃2扩增/过表达、PIK3CA突变、NTRK融合 和肿瘤突变负荷（TMB）。

专家意见：对于经标准治疗失败的mCRC患者，可进 行Her⁃2扩增/过表达和NTRK基因融合的检测；PIK3CA突 变检测和TMB检测仅限研究使用。

（三）遗传易感性基因检测

对结直肠癌的遗传易感性基因的检测需要在胚系细胞 中检测才能明确。严格意义的胚系细胞是指精子和卵子。 考虑到样本采集的便利性，临床上常用外周血淋巴细胞或 口腔黏膜细胞代替。

专家意见 ：对于临床上怀疑诊断家族性息肉病、林奇 综合征和P⁃J综合征等家族遗传性疾病者，推荐行相关遗传 易感性基因的胚系突变检测。

（四）结直肠癌相关蛋白表达检测

IHC检测是指用标记的特异性抗体在组织细胞原位通 过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应，对相应抗原进行定 性、定位、定量测定的一项免疫检测方法。

专家意见：对于结直肠癌患者，推荐对经手术切除或 活检的原发灶或转移灶组织标本行相关分子标志物的蛋白 表达水平检测，以帮助判定肿瘤来源和类型。

随着近年分子生物学在结直肠癌领域的研究不断深入， 分子标志物在疾病诊断、指导治疗、预后分析等临床实践中起到了越来越重要的作用。加强对分子标志物机制、意义的 认识，合理应用分子标志物在结直肠癌治疗中的指导作用， 提高NGS等技术在结直肠癌分子标志物检测中的应用，是现阶段临床医生在临床实践中的必备技能，也是未来临床科研 工作者的重要方向。

参考文献

中国临床肿瘤学会（CSCO）结直肠癌专家委员会.结直肠癌分子标志物临床检测中国专家共识,中华胃肠外科杂志2021年3月第24卷第3期